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使用檢測(cè)試劑盒進(jìn)行試驗(yàn)時(shí),應(yīng)分別以陽(yáng)性對(duì)照與陰性對(duì)照控制試驗(yàn)條件,待檢樣品應(yīng)作一式二份,以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時(shí)本底較高,說(shuō)明有非特異性反應(yīng)。
  在檢測(cè)試劑盒中,進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的,其中包括:
  固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,如聚氯yixi、聚苯y(tǒng)ixi、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯y(tǒng)ixi凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進(jìn)行篩選:用等量抗原包被,在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng),觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
  包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時(shí),要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時(shí)。蛋白質(zhì)包被的適濃度需進(jìn)行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進(jìn)行包被后,在其它試驗(yàn)條件相同時(shí),觀察陽(yáng)性標(biāo)本的OD值。選擇OD值大而蛋白量少的濃度。對(duì)于多數(shù)蛋白質(zhì)來(lái)說(shuō)通常為1~10μg/ml。
  檢測(cè)試劑盒使用的注意事項(xiàng):
  1.本試劑盒僅適用于對(duì)豬血清或血漿中豬瘟病毒抗體的檢測(cè),不能用于其他畜類(lèi)樣品的檢測(cè)。所有樣品、洗棄液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
  2.試劑盒保存于2-8℃,使用前整套試劑應(yīng)平衡至室溫。
  3.試劑開(kāi)封后如未用完,板條應(yīng)和干燥劑一起放入自封袋內(nèi)密封2-8℃保存,一周內(nèi)使用,其它液體組份使用后瓶蓋應(yīng)擰緊置2-8℃保存,一周內(nèi)使用。
  4.檢測(cè)時(shí)必須設(shè)置空白對(duì)照(只加顯色劑和終止液,不加酶標(biāo)結(jié)合物),并在結(jié)果分析時(shí),單波長(zhǎng)測(cè)定應(yīng)扣除空白值,雙波長(zhǎng)測(cè)定不應(yīng)扣除空白值。
  5.注意控制反應(yīng)時(shí)間,溫育30分鐘應(yīng)控制在30±2分鐘內(nèi),溫育10分鐘應(yīng)控制在10±1分鐘內(nèi),避免因反應(yīng)時(shí)間縮短或延長(zhǎng)而造成整體顯色降低或升高。
  6.試劑過(guò)期不得使用,不同批號(hào)的試劑盒中的組份不得混用,封板膜不得重復(fù)使用,試劑瓶蓋切勿交叉使用。